树突状细胞(dendritic cell,DC)被认为是目前最强大的抗原递呈细胞(APC)。一只DC可以激活多达100-3000个T细胞,其效率是巨噬细胞和B细胞的100到1000倍。这些细胞通过处理肿瘤抗原并将其递呈给T细胞,显著促进初始T细胞的增殖。值得一提的是,其他类型的APC(如巨噬细胞和B细胞)只能刺激已经活化或记忆状态的T细胞。
目前,DC的体外培养主要是通过细胞因子从骨髓、外周血和脐带血的DC前体进行定向诱导。在这些来源中,外周血由于采集方便,更加适合临床应用,且不需要复杂的筛选与纯化过程。这使得外周血成为获取DC的理想途径。
在细胞因子的诱导下,CD14+单核细胞的培养过程如下:首先,通过Ficoll梯度离心法从全血中提取人外周血单个核细胞(PBMC)。随后,采用贴壁法或磁珠法富集CD14+单核细胞。贴壁法需要将PBMC铺在培养板上,并在37℃下培养1-2小时,让单核细胞贴壁。然后,通过摇动培养板去除未贴壁的细胞。磁珠法则通过CD14+磁珠的阳性分选,高效获取高纯度的单核细胞。
在培养的第三天,进行半量换液以减少培养基中的细胞负荷,之后重加含GM-CSF和IL-4的等体积新鲜培养基,继续培养两天。值得注意的是,经过这一阶段,贴壁的细胞会轻微浮起,形成半悬浮状态的DC。第五天时,轻轻吹打培养基,收集悬浮细胞和松散的贴壁细胞,通过离心收获未成熟的MoDC。在第8天,细胞形态会发生显著变化,变得更加展现出成熟DC的特征,体积增大且表面突起增多。
通过流式细胞检测方法,可以分析DC的成熟状态及其功能特征,通常检测CD14、HLA-DR、CD1a/CD83、CD40/80/86以及DC-SIGN等分子。此外,监测IL-6、TNF-α和MCP-1等细胞因子,能够更加全面地反映人DC的免疫调节功能。
DC能够有效激活T细胞,引发免疫反应,透过MLR(Mixed Lymphocyte Reaction)法检测T细胞的增殖反应,可以评估免疫应答的强度。强生物制剂生命科学公司——人生就是博-尊龙凯时,提供高活性、低内毒素且具有高批间一致性标准的细胞因子,为DC的高效、稳定和合规培养提供了有力支持。
通过这些创新的细胞培养技术与方法,人生就是博-尊龙凯时致力于在生物医疗领域推动更为精准和有效的癌症免疫治疗的发展。